檢測依據(jù)：2020年版《中國藥典》四部 通則 1106

用于能在有氧條件下生長的嗜溫細菌和真菌的計數(shù)。

• 用于檢查非無菌制劑及無菌制劑及其原、輔料的等是否符合規(guī)定的微生物限度標準

• 除另有規(guī)定外，本法不適用于活菌制劑的檢查。

供試品微生物計數(shù)所使用的的培養(yǎng)基應進行適用性檢查；

供試品的微生物計數(shù)方法應進行方法適用性試驗，包括需氧菌總數(shù)計數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)，以確認所采用的方法適合于該產(chǎn)品的微生物的微生物計數(shù)。

試驗菌種：

l 金黃色葡萄球菌 [Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003]

l 銅綠假單胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104]

l 枯草芽孢桿菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501]

l 白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001]

l 黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003]

按表1規(guī)定，接種不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）管或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板（TSA）或沙氏葡萄糖瓊脂平板（SDA），置表1規(guī)定條件下培養(yǎng)。每一試驗菌株平行制備2管或2個平板。同時，用相應的對照培養(yǎng)基替代被檢培

養(yǎng)基進行上述試驗。

被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應在0.5~2范圍內，且菌落形態(tài)大小應與對照培養(yǎng)基的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較，試驗菌應生長良好。

陰性對照 應無菌生長，如有菌生長，應進行偏差調查。

計數(shù)方法適用性檢查

1、供試液制備

根據(jù)供試品的理化特性與生物學特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時，應均勻加熱，且溫度不應超過45℃。供試液從制備至加入檢驗用培養(yǎng)基，不得超過1小時。

水溶性供試品

• 取供試品，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，溶解或稀釋制成1：10供試液。

• 若需要，調節(jié)pH值至6~8。

• 必要時用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。水溶性液體制劑也可用混合的的供試品原液作為供試液。

常見供試品制備方法

水不溶性非油脂類供試品

油脂類供試品

膜劑類供試品

腸溶及結腸溶制劑供試品

氣霧劑供試品

貼劑、貼膏劑供試品

• 如果經(jīng)確認均不適用，應建立其他適宜的方法。

2、接種和稀釋

• 按表2規(guī)定及下列要求進行供試液的接種和稀釋，制備微生物回收試驗用供試液。

• 所加菌液的體積應不超過供試液體積的1%。

• 為確認供試品中的微生物能被充分檢查，首先應選擇至低稀釋級的供試液進行計

數(shù)方法適用性檢查。

試驗組：取制備好的供試液，加入試驗菌液，混勻，是1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。

供試品對照組： 取制備好的供試液，以稀釋液代替菌液同試驗組操作

菌液對照組 ：取不含中和劑及滅活劑的相應稀釋液替代供試液，按試驗組操作加入試驗菌液并進行微生物回收試驗。

如果供試品對微生物生長的抑制無法以其他方法消除，供試液可經(jīng)過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再加入試驗菌懸液進行方法適用性試驗。

3、抗菌活性的去除或滅活

若試驗組菌落數(shù)-供試品對照組菌落數(shù)＜菌液對照組菌落數(shù)值的50%，可采用下述方法

• 增加稀釋液或培養(yǎng)基體積

• 加入適宜的中和劑或滅活劑

• 采用薄膜過濾法

• 上述幾種方法的聯(lián)合使用

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